CRISPR/Cas9基因编辑技术（包含Base editor）专题研讨会（5.14-15 局域网精讲班

高效率的脱靶疑问

三、Cas肽的选择

1、Cas肽的选择

1.1、Cas肽的分类学

1.2、三种分析步骤最相当多的Cas肽

1.3、Cas9肽的结构不同之处除此以外

1.4、Cas9肽与PAM序列

1.5、Cas9的密码子冗余与NLS

1.6、如何选择Cas肽？

2、Cas肽水资源查询

3、以上概要系统性医学险恶研究的除此以外、医学险恶研究精准、医学险恶研究结果教导

第一天下午13:30-17:00

四、CRISPR（gRNA）的新设计与高纯度

1、新设计gRNA之前需要已确定的有事（总编方针的选择、性状结构分析及查询步骤）

2、RNA的新设计（在线互动新设计演练）

3、gRNA隐含表征的框架

3.1、gRNA的排泄隐含（RNP）

3.2、gRNA肝细胞隐含表征框架

3.3、少用gRNA/Cas肽隐含表征

4、以上概要系统性医学险恶研究的除此以外、医学险恶研究精准、医学险恶研究结果教导

五、gRNA活性检查

1、 Indel等位基因检查的基本方针

1.1、错配内切蛋白通则（EMC）

1.2、TIDE/ICE分析通则

1.3、TA生化通则

1.4、蛋白切段落长度多态性通则（RFLP）

1.5、其他步骤

2、基于受精卵的活性验证步骤

3、以上概要系统性医学险恶研究的除此以外、医学险恶研究精准、医学险恶研究protocol、医学险恶研究结果教导

六、性状总编用以Cas12a(Cpf1)

1、Cpf1的断定

2、Cpf1与Cas9的区别

3、Cpf1的分析步骤例子

4、Cpf1可同时介导多个性状的总编

第二天傍晚8:30-11:30

七、利用CRISPR/Cas9高效率创立性状组总编肝细胞系

1、尽可能性状的性状组构成分析

1.1 尽可能性状在目的肝细胞里的隐含情形

1.2 如何已确定性状的不可或缺的功能域

1.3 可变编导及多核糖体本

2、性状组总编方针新设计

2.1性状敲除

2.2性状敲入

2.3移动式等位基因

2.4大段落删除

3、sgRNA的新设计与活性验证

3.1 如何选择位置合适的gRNA？

4、用于性状敲入的可酪氨酸DNA的新设计

4.1 Donor DNA的形式

4.2 使用ssODN作为Donor

4.3 新设计ssODN的要点

4.4 插入位点与DSB位点相符的情形

4.5 插入位点与DSB位点不相符的情形

5、核酸（和/或可酪氨酸）导入肝细胞系的步骤（脂质体转染，电转，感染转导）

6、阳性生化比对

6.1 抗生素比对（Protocol）

6.2 挑单肝细胞生化（Protocol）

6.3 性状型核对

6.4根据打靶效率推估需要比对的生化数量

6.5 有限浓缩通则浓缩肝细胞的流程（Protocol）

6.6 性状型核对

7、性状组总编肝细胞系的建立

8、提高性状敲入（同源重组）效率的方针

9、以上概要系统性医学险恶研究的除此以外、医学险恶研究精准、医学险恶研究protocol、医学险恶研究结果教导

八、CRISPR/Cas种系统介导的性状总编例子讲解

1、CRISPR值得注意工作流程

2、Knock-out例子1

3、Knock-out例子2

4、Knock-in例子

第二天下午13:30-17:00

九、利用CRISPR高效率创立性状组总编爬虫类

1、CRISPR/Cas步骤与传统步骤的比较

2、性状总编爬虫类高纯度流程

3、通过显微注射通则高纯度性状总编血清

3.1、血清的超排和显微注射

3.2、受精卵移植和性状型核对

3.3、显微注射通则获的性状总编爬虫类的核对

4、通过体肝细胞生化通则高纯度性状总编爬虫类

4.1、可酪氨酸肝细胞分离、培养

4.2、可酪氨酸肝细胞的性状总编

4.3、体肝细胞核移植操作

4.4、受精卵移植

4.5、性状总编母体的核对和扩繁

十、CRISPR核糖体抑制作用/核糖体转录以及CRISPRscreen

1、dCas9的特征除此以外

2、运用CRISPR高效率透过核糖体抑制的原理

3、CRISPR核糖体抑制作用/核糖体转录高效率及冗余

4、CRISPRoff

5、CRISPR screen及CRISPRa/iscreen（高通量比对）

十一、单胺基酸总编与单胺基酸总编器（CBE、ABE、PE）

1、 单胺基酸总编器的原理

2、 单胺基酸总编器的冗余

3、 先导总编高效率原理及其分析步骤

十二、性状总编高效率的脱靶疑问

1、 脱靶转化成的原因

2、 性状总编用以的脱靶高风险

3、 脱靶检查步骤

4、 如何降低脱靶？

十三、Cas12和Cas13肽及其分析步骤

1、 Cas12和Cas13与Cas9的差异

2、 Cas13不同之处及其在核酸检查里的分析步骤

3、 SHERLOCK及DETECTR种系统原理

十四、性状总编高效率系统性水资源

讲解CRISPR/Cas种系统以及性状总编系统性的核酸、gRNA、漫画版、肝细胞、Protocol以及高效率blog等水资源。

会务的资讯

一段时间场所：

2022/5/14-15 使用腾讯全体会议客户端透过在线讲课（非录播)

持有人开支：

3200元/人

主办单位付费取得成功后，课前发专业训练需要分析步骤到的软件，并且指导安装

两天比较大网络平台授课，互动性好；

可开具会务费、科研人员费、测序费、检查费等挂号；

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